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卵圆鞭毛虫(Amyloodinium ocellatum,嗜酸卵甲藻)

卵圆鞭毛虫.png 卵圆鞭毛虫 生命周期.png 是一种广泛分布的 甲藻,寄生于咸水和海水环境中的众多水生生物。甲藻是温带和热带地区的特有物种,能够成功适应各种不同的环境和大量宿主,已在四个水生生物门中发现:脊索动物门、节肢动物门、软体动物门和扁形动物门。此外,它是唯一能够感染硬骨鱼类和板鳃类的甲藻。 这种寄生虫对饲养鱼类和观赏鱼类来说都是一个严重的问题,因为由这种原生动

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是一种广泛分布的 甲藻,寄生于咸水和海水环境中的众多水生生物。甲藻是温带和热带地区的特有物种,能够成功适应各种不同的环境和大量宿主,已在四个水生生物门中发现:脊索动物门、节肢动物门、软体动物门和扁形动物门。此外,它是唯一能够感染硬骨鱼类和板鳃类的甲藻。

这种寄生虫对饲养鱼类和观赏鱼类来说都是一个严重的问题,因为由这种原生动物引起的感染淀粉样变性病可导致宿主在不到 12 小时内死亡,急性发病率和死亡率约为 100%。然而,这两个参数会因养殖类型、寄生虫负担、鱼类种类和季节的不同而有很大差异。通常,淀粉样变性病通常存在于陆地或泻湖养殖场(水产养殖或内陆咸水养殖),这些地方的浅海床和较差的水交换/再循环使寄生虫能够达到其最佳增殖值。特别是在最温暖的月份,眼斑淀粉样变性病会导致高死亡率和经济损失。

生命周期

A. ocellatum的生命周期是直接的,分为三个阶段。一般来说,当温度和盐度分别在 23-27 °C 和 30-35 ppt 之间时,它可以在五到七天内完成。然而,寄生虫也可以在极端条件下表现出其毒性。特别是在高温(超过 35 °C)下,在盐水(46 ppt)和咸水(7 ppt)环境中都记录到了致命的爆发。

寄生阶段以固着营养体为代表。在此阶段,原生动物呈梨形,包裹在纤维素壁中,并具有特殊结构,即根状物(触手状突起),使其能够严格固定在宿主上皮(主要是鳃或皮肤)上。如果感染严重,营养体也会出现在眼睛、鳍和整个口咽腔中,后者是欧洲鲈鱼(Dicentrarchus labrax)的典型感染部位。营养体在固定状态下不断移动,从而对细胞造成物理伤害,对宿主造成严重损害,可能在 12-48 小时内因寄生虫负担而导致宿主死亡。根据文献中的数据,滋养体直接从宿主细胞中获取营养,可能通过口足释放消化酶需要澄清, 这会加剧假根病变。滋养体大小差异很大,早期滋养体尺寸为 27×23 微米,而成熟滋养体尺寸可达 130×60 微米甚至更大。

摄食后两到六天,滋养体脱离宿主,在惰性基质(池塘/水槽底部或海床)上形成包囊,进入生殖阶段。在此阶段,原生动物呈圆形,被包裹在纤维素壁中,纤维素壁变得更厚,使其对不利条件和多种治疗方法具有极强的抵抗力。原生动物无性繁殖,第一次分裂是纵向的,而后续分裂大致规则,彼此成直角。可能在两到四天内,一个生殖阶段可以产生 256 个新的孢子。新形成的孢子数量与滋养体的营养状态直接相关。

甲壳孢子(8–13.5 × 10–12.5 微米)是感染阶段,其前后压缩的形状类似于汉堡包。在此阶段,装甲(纤维素壁)原生生物能够通过两条鞭毛主动游泳:一条纵向,另一条横向。附着到新宿主后,甲壳孢子会在 5 到 20 分钟内转变为营养体。

病理学和临床症状

是所谓的“海洋丝绒病”或淀粉样变性病的病原体(过去也称为 oodiniosis,因为这种原生动物最初被称为Oodinium ocellatum)。这种感染对宿主来说极其危险,有时甚至是致命的,因为它会伤害动物并引发继发性细菌感染。如果鱼类对A. ocellatum毫无抵抗力,则所有生命阶段的鱼类都可能易感。这种原生动物的致病性与营养体附着在宿主组织上有关;营养体不断扭曲和转动,慢慢损坏并杀死多个宿主细胞。它们会引起中度至强烈的组织反应,并伴有严重的鳃增生、炎症、出血和坏死,严重感染的样本会在 12 小时内死亡。然而,在亚临床或轻度感染中也记录了一些死亡,这可能是由于严重的上皮损伤导致 渗透调节障碍和继发性微生物感染造成的。

通常,宿主的行为变化是淀粉样变性病的首发症状,表现为抽搐(闪光)、瘙痒和呼吸困难,并聚集在水面。感染晚期会出现嗜睡和厌食。淀粉样变性病的另一个临床症状可能是皮肤呈粉尘状(因此得名“海洋丝绒病”),如欧洲鲈鱼,但并非所有鱼类都有这种症状。

影响

A. ocellatum不仅对养殖鱼类构成严重问题,而且对水族箱中的鱼类也构成严重问题。根据与养殖类型、寄生虫负担、鱼类种类和季节的相互作用,淀粉样变性病可在不到 12-48 小时内导致宿主死亡,急性发病率和死亡率约为 100%。通常,感染会影响陆地或泻湖养殖场所(水产养殖或内陆咸水养殖),这些场所的特点(浅海床和水交换/再循环不良)使寄生虫能够最好地表现出其毒性。在最温暖的月份,当寄生虫达到其最佳增殖率时,A. ocellatum能够造成高死亡率和经济损失。

诊断

淀粉样变性病的诊断包括观察典型的临床症状和使用非致命技术。建议采用湿式涂片检查皮肤刮片和鳃活检的细胞学方法来检测营养体。可以通过轻轻提起鳃盖结构在立体显微镜下直接观察麻醉后的小型鱼。也可以对死后的鱼采用相同的方法,但最好检查刚死亡的鱼,因为寄生虫通常会在宿主死亡后不久脱落。在皮肤或鳃上滴一些稀释的卢戈氏碘有助于提高对眼斑拟南芥的检测率,因为碘会与含淀粉的营养体发生反应,使其变成深褐色/黑色。

除临床和显微镜鉴定外,分子鉴定可作为第二个确认性诊断步骤。最近开发的分子方法(PCR和 LAMP)已被证明可以在水和鳃组织样本中早期检测出甲藻,即使寄生虫的浓度最低,例如亚临床感染。因此,这些方法可能可以高灵敏度地监测易感鱼群中的病原体负荷。A. ocellatum的分子诊断基于引物 AO18SF(5' GACCTTGCCCGAGAGGG 3')和 AO18SR(5' GGTGTTAAGATTCACCACACTTTCC 3')用于LSU rDNA 基因 3' 端 248 bp 片段的PCR 扩增。 使用CLUSTALw进行多重序列比对证实,测序的 AO 与来自地中海(DQ490256.1)、红海(DQ490257.1)、中国福建(KU761581.1 和 KR057921.1)、美国密西西比州南部(JX905204.1)的不同地理分离株保守。然而,这些技术仍然局限于实验室环境。

同时,ELISA(酶联免疫吸附试验)等免疫学方法可以检测出从淀粉样变性病爆发中恢复过来的鱼或实验中接触过寄生虫的鱼中特异性抗眼斑拟南芥抗体水平。ELISA 试验可能有助于监测易感人群的保护水平,因为抗体滴度升高与抗药性有关。

治疗

自 20 世纪 30 年代以来,人们进行了多项努力,试图控制各种鱼类的淀粉样变性病,但没有一种治疗方法被证明是完全有效的,也没有一种治疗方法在世界范围内得到批准。早期诊断和及时治疗至关重要,因为原生动物在最温暖的月份具有指数级的繁殖潜力,温度会影响寄生虫的繁殖速度。化学治疗包括福尔马林(36% 甲醛,浓​​度为 4mg/L,持续 7 小时或 51mg/L,持续 1 小时)、过氧化氢(75 和 150mg/L,持续 30 分钟,6 天后重复)、硫酸铜和氯喹(5-10 mg/L 水)。然而,只有藻孢子对某些药物表现出明显的敏感性,而营养体和藻体则更具抵抗力。

硫酸铜是控制水产养殖中眼斑藻流行的最有效治疗方法之一,因为游离铜离子具有已被证实的杀藻孢子特性,而且价格低廉且易于获取。将 0.75-1 g/m 3的硫酸铜滴入池塘/水箱中,持续近两周,保持恒定的铜浓度,可非常有效地杀死藻孢子,而藻体和营养体则不太容易受到影响。目前,尽管硫酸铜被批准为有效的除藻剂,但尚未获得欧洲法规 n. 1907/2006 (REACH) 的批准,作为淀粉样藻病的治疗方法。

由于宿主会经历突然的渗透冲击,淡水浴是将营养体从皮肤和鳃上皮中分离出来的有效方法。然而,淡水浴程序对于大多数海水养鱼场来说仍然不切实际,而且有些鱼类无法忍受类似的处理。

其他控制策略

由于A. ocellatum无法完全控制,因此控制策略旨在作为预防措施,避免危险的爆发。有效的过滤系统和适当的卫生程序(即使用紫外线结合机械过滤进水)有助于降低感染风险。必须强调的是,甲壳虫孢子可以通过气溶胶液滴传播,因此,如果被强风吹散,会污染农场设备和/或相邻的池塘/水箱以及附近的设施。因此,农场应强制执行严格的材料消毒规程和充分的管理措施。

另一个需要考虑的方面是选择合适的养殖地点。寄生虫病可能受其特性影响。通常,海水网箱养殖的鱼不会受到感染的影响,而在淡水养殖或内陆咸水养殖系统中控制感染则更加困难。

虽然正在进行一些研究以确定寄生虫的潜在疫苗候选蛋白(即 i 抗原),但无法通过接种疫苗来预防该疾病。从淀粉样变性病中幸存下来的鱼可能至少会产生部分免疫力。