![[革兰氏染色.png]]
步骤
| 步骤 | 名称 | 所用物质 | 细节 | 现象 | | | --- | -------- | ---------------------------------------------- | ----------------------------- | --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- | --- | | 1 | | | 在玻片上滴上一小滴蒸馏水或生理盐水 | | | | 2 | | | 用接种环挑一点细菌进去混匀，等待自然风干 | | | | 3 | | | 把玻片在酒精灯上轻轻划过2~3次 | 可把细菌热固定在玻片上 | | | 4 | 初染 | 草酸铵结晶紫/水晶紫（结晶紫，Crystal violet） | 用染剂覆盖菌膜60s，然后用水冲洗 | 细菌的[[0. 肽聚糖（peptidoglycan）]]层会被染上<span style="color:purple">紫色</span>或<span style="color:violet">紫罗兰色</span> | | | 5 | 媒染 | 碘液 | 用碘液覆盖菌膜60s，然后用水冲洗 | [[0. 细胞膜]]染上结晶紫和碘复合形成大团块（结晶紫-碘复合体【Crystal Violet-lodine Complex）】，细胞依然呈现<span style="color:purple">紫色</span>或<span style="color:violet">紫罗兰色</span> | | | 6 | 脱色 | [[乙醇（ethanol，alcohol）]]+[[丙酮（acetone）]]混合液<br> | 将混合液滴在菌膜上，让其缓缓流过，直到紫色不再渗出为止。 | [[革兰氏阳性菌（G+菌）]]的[[0. 细菌细胞壁]]的[[0. 肽聚糖（peptidoglycan）]]网孔因脱水而收缩明显，导致结晶紫和碘复合物【Crystal Violet-lodine Complex）】被阻留在[[0. 细菌细胞壁]]内；<br><br>[[革兰氏阴性菌（G-菌）]]的[[0. 细胞壁外膜（outer membrane）]]被破坏，由于其[[0. 肽聚糖（peptidoglycan）]]层结构松散，结晶紫和碘复合物【Crystal Violet-lodine Complex）】被洗去脱色。 | | | 7 | 复染（对比染色） | 番红 | 用染剂覆盖菌膜30s，并用水冲洗干净，再用吸水纸轻轻印干。 | 会把[[0. 肽聚糖（peptidoglycan）]]层、[[0. 细胞膜]]、[[细菌的细胞质]]等染上<span style="color:red">红色</span>或<span style="color:pink">粉色</span>，[[革兰氏阴性菌（G-菌）]]的颜色会凸显，而[[革兰氏阳性菌（G+菌）]]的颜色变化不大。 | |